Biocoll細胞分離液的應用

組織和血液中的細胞常非單一類型，因此分離特定的細胞需要采用專門的方法。其中，最常用的是密度梯度離心法。即通過細胞分離液在離心管內形成連續或不連續的密度梯度，將細胞懸液置于液體的上部，通過離心力場的作用使細胞分層分離。

在市面上常見的細胞分離液中，Biocoll是常用且較為知名的一種。它誕生于2007年，當時發現一種親水高分子聚合物，分子量約為400Kda，用于分離淋巴細胞和胰島細胞效果良好，可很好地保持所分離細胞的功能。隨后，Biocoll細胞分離液被美國NIH指定為胰島細胞的專用分離液。

Biocoll是德國Biochrom公司出品，有1.10g/ml和1.077g/ml兩種。1.10g/ml可再用無鈣鎂離子的PBS調節為其他濃度。代理商北京締一生物公司暨上海威正翔禹生物公司備有1.10g/ml密度的Biocoll分離液現貨，方便研究者對血細胞或淋巴細胞的分離。

對于淋巴細胞分離，它的使用步驟如下：

1）將7mLBiocoll細胞分離液（D=1.077g/mL, 20℃）放入15mL離心管中。或將10ml Biocoll細胞分離液放入25mL離心管中。

2）將肝素化抗凝全血（50U/mL肝素，無穩定劑）與等體積培養基混合均勻，小心添加在Biocoll細胞分離液的液面上。

3）1200g離心20min。

4）用巴斯德吸管吸取（70-100%）淋巴細胞富集層（位于血漿和Biocoll之間），加入培養基中洗2次，一次300g離心10min，另一次200g離心10min，即可得所需淋巴細胞，接著可進行常規細胞計數。

Biocoll細胞分離液為即用型，滲透壓和pH值已調整為最適水平。下圖為不同類型血細胞對應的分離密度。

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