Biocoll細(xì)胞分離液的應(yīng)用

組織和血液中的細(xì)胞常非單一類(lèi)型，因此分離特定的細(xì)胞需要采用專(zhuān)門(mén)的方法。其中，最常用的是密度梯度離心法。即通過(guò)細(xì)胞分離液在離心管內(nèi)形成連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細(xì)胞懸液置于液體的上部，通過(guò)離心力場(chǎng)的作用使細(xì)胞分層分離。

在市面上常見(jiàn)的細(xì)胞分離液中，Biocoll是常用且較為知名的一種。它誕生于2007年，當(dāng)時(shí)發(fā)現(xiàn)一種親水高分子聚合物，分子量約為400Kda，用于分離淋巴細(xì)胞和胰島細(xì)胞效果良好，可很好地保持所分離細(xì)胞的功能。隨后，Biocoll細(xì)胞分離液被美國(guó)NIH指定為胰島細(xì)胞的專(zhuān)用分離液。

Biocoll是德國(guó)Biochrom公司出品，有1.10g/ml和1.077g/ml兩種。1.10g/ml可再用無(wú)鈣鎂離子的PBS調(diào)節(jié)為其他濃度。代理商北京締一生物公司暨上海威正翔禹生物公司備有1.10g/ml密度的Biocoll分離液現(xiàn)貨，方便研究者對(duì)血細(xì)胞或淋巴細(xì)胞的分離。

對(duì)于淋巴細(xì)胞分離，它的使用步驟如下：

1）將7mLBiocoll細(xì)胞分離液（D=1.077g/mL, 20℃）放入15mL離心管中。或?qū)?0ml Biocoll細(xì)胞分離液放入25mL離心管中。

2）將肝素化抗凝全血（50U/mL肝素，無(wú)穩(wěn)定劑）與等體積培養(yǎng)基混合均勻，小心添加在Biocoll細(xì)胞分離液的液面上。

3）1200g離心20min。

4）用巴斯德吸管吸取（70-100%）淋巴細(xì)胞富集層（位于血漿和Biocoll之間），加入培養(yǎng)基中洗2次，一次300g離心10min，另一次200g離心10min，即可得所需淋巴細(xì)胞，接著可進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞計(jì)數(shù)。

Biocoll細(xì)胞分離液為即用型，滲透壓和pH值已調(diào)整為最適水平。下圖為不同類(lèi)型血細(xì)胞對(duì)應(yīng)的分離密度。

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