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MB支原體污染祛除試劑能解決細胞生長緩慢的問題嗎?2022-12-23 15:57作者:締一生物
進行細胞實驗的過程中,相信大家都有這樣的經歷:實驗規劃恨不得精細到每小時,甚至連哪天出數據都預估好了。理想很豐滿,現實往往很骨感!“隔壁王師兄的細胞都能傳代了,我的這細胞,咋長得這么慢呢?”所以今天,我們就來聊聊,細胞生長緩慢(異常情況的慢,一些特殊細胞不在討論范圍內)的可能原因。原因很復雜,小編今天結合MB支原體污染祛除試劑總結以下幾點,如果小伙伴們有更多觀點,歡迎補充。 細胞可能存在污染各類細胞污染,都有可能導致細胞生長緩慢。如果培養體系,不小心被細菌、真菌、支原體污染,都會導致細胞因缺乏營養而出現生長緩慢的現象。 細菌污染發展迅速,一般會出現培養基渾濁、變黃的現象;真菌污染不好辨認,顯微鏡下可見絲狀菌體(有些甚至嚴重到肉眼可見);而支原體污染往往防不勝防,顯微鏡下也很難捕捉到它的身影。支原體污染的典型特征是培養基提前變黃、細胞生長受阻,后期細胞大量死亡等。 因此,如果細胞生長緩慢,首先要考慮細胞是否存在污染。 沒有根據細胞特性調整培養體系,細胞的體外培養,依賴于完全培養基的支持與保護。有些小伙伴拿到一株陌生的細胞,沒有將培養體系研究清楚就開始實驗,由于培養環境的改變,導致細胞一時無法適應,而出現生長受阻甚至停滯的狀態。 當我們排除了細胞污染的情況后,就要考慮培養體系是否合理了:培養基種類、品牌是否進行過更換?血清類型是否用錯等等,盡可能保證與原培養條件一致,如果要更換,也要循序漸進。 細胞初始狀態較差細胞長得慢,很可能不是你的鍋。可能最一開始復蘇的細胞,就被污染/活力不足。因此,建議大家再復蘇一管同種細胞(有可能不是同批次凍存的),與現有細胞進行比較,觀察長勢。 公共設備可能存在問題,儀器的參數也會影響細胞狀態。如果細胞不存在污染,培養體系沒有瑕疵、細胞初始狀態也沒有問題,那么可以考慮公共儀器設備是否存在紕漏。 最常見有水浴鍋溫度、室內溫度及濕度、培養箱參數、水浴鍋溫度等。 水浴鍋是細胞培養室常用的儀器,要定期用溫度計對其工作溫度進行檢查,觀察是否存在溫度不準、溫度驟變的情況。另外要強調一點,水浴鍋也是常見的污染源之一,水浴鍋中的水使用無菌水,并定期做好清潔工作,推薦大家使用MB WaterShield支原體污染祛除水槽專用祛除劑,可以有效清除、預防水槽中的支原體,方便安全、省時省力省心。 細胞實驗室的溫度及濕度:儀器還是操作對溫度沒有特殊要求,維持舒適的溫度即可,比如18~26℃;過高的濕度會導致微生物的滋生,所以建議正常維持濕度在70%以下。應定期用溫度濕度測試儀對細胞實驗室進行檢測,以防溫控系統出現故障。 培養箱參數:一般哺乳類與禽類細胞在體外培養的適宜溫度是37~38℃;大多數細胞適宜的pH范圍往往是7.2~7.4。在開放式培養中,以5%的二氧化碳氣體比例為宜。但在實際操作過程中,細胞培養箱有可能會出現以下故障,影響細胞培養體系,進而使細胞生長變得緩慢: 溫度和溫度設定不準; 細胞培養箱濕度不能維持; 細胞培養箱的二氧化碳濃度不準。 對應解決方法給大家整理好,建議大家保存,以備不時之需。 實驗人員可能發生變化,細胞“飼養員”的更換也可能影響細胞生長速率。作為一名合格的細胞“飼養員”,一定要預先了解所養細胞的“習性”:用哪種培養法、使用何種類型培養體系(血清種類、基礎培養基類型、是否添加生長因子以及抗生素等),盡可能還原初始的培養環境,讓細胞有個適應的過程。另外,實驗者自身也要注意操作規范,按照標準流程培養。 實驗試劑可能發生改變培養用的試劑也可能會是影響因素。 不同品牌的試劑可能會有些許差別,對于一些比較嬌貴的的細胞,這些細微的差別很可能會導致細胞生長受到影響。因此我們一直強調大家“追本溯源”,盡可能用與原來一致的培養條件。 如果要更換試劑,建議大家先做個對照試驗,看看新的試劑對細胞生長有沒有影響。 另外,除了以上這六點,還有一點需要特別注意,就是:細胞的代次 一般來說,細胞傳代次數是一定的(一些癌細胞系屬于特例),特別是像間充質干細胞這類對代次比較敏感的細胞,需要格外注意,傳代次數過高后(10-15代左右),細胞生長速率也會明顯減慢。在實驗時,盡量選擇代次較低且狀態穩定的細胞。 上一篇: 淺談qPCR檢測中「內參」的意義
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