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PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室如何避免的假陽(yáng)性問題出現(xiàn)

2023-12-20 14:58
文章附圖

PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的假陽(yáng)性問題主要是由于引物設(shè)計(jì)不合適、靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染等原因?qū)е碌摹?/span>

為避免假陽(yáng)性問題的出現(xiàn)，可以采取以下措施：

引物設(shè)計(jì)要合適，需選擇擴(kuò)增序列與非目的擴(kuò)增序列無同源性的引物，并避免選擇靶序列太短或引物太短的情況。

避免交叉污染，包括整個(gè)基因組或大片段的交叉污染和空氣中的小片段核酸污染。操作時(shí)應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣槍內(nèi)或?yàn)R出離心管外。除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。所用離心管及樣進(jìn)槍頭等均應(yīng)一次性使用。必要時(shí)，在加標(biāo)本前，反應(yīng)管和試劑用紫外線照射，以破壞存在的核酸。

在PCR分區(qū)中，應(yīng)設(shè)置試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)，并確保各分區(qū)之間的良好通風(fēng)。

如果基層PCR實(shí)驗(yàn)室沒有正負(fù)壓系統(tǒng)，則要求不同試驗(yàn)區(qū)域保持良好的通風(fēng)，且通風(fēng)口不能朝向?qū)?cè)試驗(yàn)區(qū)域。

盡量采用巢式PCR方法來減輕或消除假陽(yáng)性。

遵循以上措施，PCR檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的假陽(yáng)性問題可以得到有效控制。

締一生物科技提供的德國(guó)MB 產(chǎn)品PCR儀器校正試劑(預(yù)分裝法)PCR Cycler Check Advance（高階版）貨號(hào)：57-2102

57-2102.jpg

PCR儀器校正試劑(預(yù)分裝法)PCR Cycler Check Advance說明

為保證PCR試驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，PCR儀器應(yīng)定期校正。

PCR Cycler Check?是用于檢測(cè)校正PCR儀的試劑盒。

此試劑盒采用對(duì)溫度敏感的PCR試劑來監(jiān)測(cè)PCR儀溫度變化。

其中的引物序列經(jīng)巧妙設(shè)計(jì)，能夠?qū)乜仄睢囟染恍浴囟葴?zhǔn)確性和耗時(shí)極為敏感。溫度偏差超過2℃，PCR的擴(kuò)增反應(yīng)即完全停止。

模板濃度也經(jīng)過預(yù)先設(shè)計(jì)，只在PCR反應(yīng)高效時(shí)才進(jìn)行擴(kuò)增，這也反映了溫控的準(zhǔn)確性。

此試劑盒常規(guī)PCR儀和熒光定量PCR(qPCR)儀均適用。

PCR儀器校正試劑(預(yù)分裝法)PCR Cycler Check Advance特點(diǎn)

預(yù)混凍干粉已分裝于PCR 8連管中。

適用范圍

用于科研實(shí)驗(yàn)室和工業(yè)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室，

以判斷是否能達(dá)到以下法規(guī)對(duì)儀器的性能要求，

如：GLP、GMP、ISO 17025、ISO13485、ISO/TS 20836、EN 45001。