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內(nèi)參在PCR實驗中的作用

2024-06-28 15:53

內(nèi)參在PCR實驗中的作用是用于校正上樣量、上樣過程中存在的實驗誤差，保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。

內(nèi)參基因的選擇對于PCR實驗至關(guān)重要，它們通常被選為那些在處理因素作用的條件下不會發(fā)生表達改變的基因。通過檢測每個樣品內(nèi)參的量，可以校正上樣誤差，從而使定量的結(jié)果更為可信。內(nèi)參基因的優(yōu)點在于它們與樣品中的靶基因經(jīng)歷完全相同的處理程序，因此可以監(jiān)控從采樣、運輸、核酸提取到擴增的全部過程。然而，內(nèi)參基因的缺點是在不同物種、不同生理狀態(tài)下，以及不同組織中存在一定的差異。例如，如果樣品類型是口腔液、咽拭子等，內(nèi)參基因的量可能很低，導(dǎo)致實驗不成立；如果檢測的是環(huán)境樣品，則內(nèi)參基因可能完全失效。

此外，內(nèi)標(biāo)的使用也是PCR實驗中的一個重要概念，它分為內(nèi)源性內(nèi)標(biāo)和外源性內(nèi)標(biāo)。內(nèi)源性內(nèi)標(biāo)使用天然樣品中含有的內(nèi)參基因作為內(nèi)標(biāo)，而外源性內(nèi)標(biāo)則是人工添加的內(nèi)標(biāo)。內(nèi)標(biāo)的**特點是與靶序列共同擴增，如果內(nèi)對照無擴增曲線，則提示實驗環(huán)節(jié)存在問題，該標(biāo)本實驗無效。人工內(nèi)標(biāo)的添加包括使用不會干擾靶序列擴增的人工合成的內(nèi)標(biāo)，以及使用人工合成的假病毒在核酸提取前在每一份樣品中加入等量的內(nèi)標(biāo)，以監(jiān)控樣品的提取到擴增的過程。盡管如此，人工添加的內(nèi)標(biāo)不能監(jiān)控胞內(nèi)細(xì)菌病毒的釋放情況。