細(xì)胞支原體污染了怎么辦

細(xì)胞支原體污染是一個(gè)常見的問(wèn)題，特別是在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中。支原體污染可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)、代謝以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生顯著影響。以下是一些處理細(xì)胞支原體污染的方法：

一、立即停止使用污染的細(xì)胞

一旦確認(rèn)細(xì)胞被支原體污染，應(yīng)立即停止使用該批次的細(xì)胞，并避免其進(jìn)一步擴(kuò)散。

二、對(duì)污染源進(jìn)行全面消毒和清潔

對(duì)培養(yǎng)環(huán)境、試劑和操作過(guò)程進(jìn)行全面消毒和清潔，以消除潛在的污染源。

三、選用適當(dāng)?shù)奶幚矸椒?/span>

根據(jù)細(xì)胞的珍貴程度和實(shí)驗(yàn)需求，可以選擇不同的處理方法：

丟棄污染細(xì)胞

對(duì)于非重要的細(xì)胞，如培養(yǎng)中的細(xì)胞、WCB的細(xì)胞等，將培養(yǎng)物與用過(guò)的培養(yǎng)基滅活后丟棄即可。

使用支原體殺除劑

對(duì)于珍貴的、樣品不可再得的細(xì)胞，或價(jià)格昂貴的種子細(xì)胞，可以選用特異性的支原體殺除劑進(jìn)行清除。例如，使用Mynox?（由Minerva公司生產(chǎn)）等生物制劑，這些試劑可在短時(shí)間內(nèi)（如2-3小時(shí)）特異性地殺除支原體，且對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性。但需注意，使用這些試劑后可能需要更換新的培養(yǎng)耗材和培養(yǎng)液，并重新培養(yǎng)細(xì)胞。

藥物輔助加溫處理

先用藥物處理污染的組織培養(yǎng)物，然后將培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時(shí)，以殺死支原體。但這種方法可能對(duì)細(xì)胞有不良影響，需要謹(jǐn)慎使用。

使用支原體特異性血清

用5%的兔支原體免疫血清可去除支原體污染。特異抗體可抑制支原體生長(zhǎng)，經(jīng)抗血清處理后一段時(shí)間（如11天）即可轉(zhuǎn)為陰性。

巨噬細(xì)胞吞噬法

從動(dòng)物腹腔采取巨噬細(xì)胞，純化后加入被支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)液中混合培養(yǎng)。巨噬細(xì)胞能夠吞噬并清除支原體。

反復(fù)離心洗滌

通過(guò)細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)馴化、優(yōu)質(zhì)細(xì)胞群的篩選、細(xì)胞清洗和反復(fù)離心洗滌等方法，利用離心力、細(xì)胞、微生物質(zhì)量和懸液的浮力差達(dá)到清除支原體的目的。這種方法可能需要結(jié)合敏感抗生素的抑殺作用以提高效果。

更換培養(yǎng)基和耗材

更換新的、經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的無(wú)支原體污染的試劑和培養(yǎng)基，并重新開始細(xì)胞培養(yǎng)。

四、預(yù)防未來(lái)污染

在實(shí)驗(yàn)室工作中，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，確保實(shí)驗(yàn)環(huán)境的清潔和衛(wèi)生。

定期對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備進(jìn)行維護(hù)和消毒，避免交叉污染。

對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)等關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)，建議進(jìn)行定期的質(zhì)量控制和監(jiān)測(cè)，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

五、注意事項(xiàng)

在處理支原體污染時(shí)，應(yīng)仔細(xì)閱讀并遵循相關(guān)試劑和設(shè)備的操作說(shuō)明。

對(duì)于不確定的處理方法，應(yīng)咨詢實(shí)驗(yàn)室管理人員或相關(guān)領(lǐng)域的專家。

支原體污染可能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生顯著影響，因此在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)進(jìn)行支原體檢測(cè)以確認(rèn)細(xì)胞的無(wú)污染狀態(tài)。