細(xì)胞傳代消化的問題

在消化的過程中，加入胰酶后，所有細(xì)胞都在被胰酶消化著，但是每個(gè)細(xì)胞的生長狀態(tài)是不一樣的，細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁較松，這一點(diǎn)往往容易被忽視。對于較難消化或?qū)σ让该舾械募?xì)胞，可以采用四步消化法，具體操作如下:

第1步:不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗1-2遍，(這是前奏，目的是將漂浮著的死細(xì)胞之類盡量洗掉。

第2步:加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，把貼壁不牢固的細(xì)胞吹打下來，再用培養(yǎng)基清洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。(可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，與后面胰酶消化過的細(xì)胞生長狀態(tài)進(jìn)行對比觀察即可知道該細(xì)胞對胰酶的敏感度。)

第3步:吸干凈瓶內(nèi)剩余液體，加入2mIPBS潤洗一遍，吸掉棄之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同時(shí)置于顯微鏡下觀察，待細(xì)胞與細(xì)胞之間間隙明顯的時(shí)候立即吸掉胰酶于干凈EP管備用，加入新培養(yǎng)基吹打2-3遍后吸取懸液于離心管或新瓶暫存。用2ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合(也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以便與后面及前面的做對比)

第4步:把第三步吸出來的胰酶重新加入瓶內(nèi)，繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細(xì)胞(也可以用新的胰酶繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細(xì)胞間隙明顯，細(xì)胞獨(dú))，立開來的時(shí)候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打，懸液傳入新瓶培養(yǎng)。

將細(xì)胞消化分成這幾步，除了是為了避免胰酶對細(xì)胞的損傷之外，還有一個(gè)更重要的作用就是，可以**程度地把細(xì)胞吹打成單個(gè)單個(gè)的狀態(tài)，不成片不連體。